HPLC法测定矢车菊素
初一 记叙文 1755字 412人浏览 欣其所郁

HPLC 法测定矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量的操作规程

目 的:建立HPLC 法测定菊素-3-O-葡萄糖苷含量的操作规程。

范 围:本标准规定了HPLC 法测定菊素-3-O-葡萄糖苷含量的操作规程,用于菊素-3-O-葡萄糖苷的含量测定。

依 据:

1. 试剂

1.1 甲醇(色谱纯)、(AR )

1.2 乙腈(HPLC 级)

1.3超纯水(娃哈哈代替)

1.4磷酸(AR )

1.5盐酸(AR )

2. 对照品

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(购自成都瑞芬生物科技有限公司)

3. 仪器和用具

3.1 电子天平(0.0001)

3.2 玻璃仪器:容量瓶、砂芯过滤装置

3.3 0.45μm 微孔滤膜及针筒式过滤器

3.4 超声波清洗器

3.5 高效液相色谱仪

4. 色谱条件

4.1 色谱柱: Kromasil 100-5 C18 250*4.6mm

4.2 流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(15:85)(V/V)

用5ml 移液管量取4ml 磷酸(H3PO4、AR 分析级)置于1000ml 容量瓶中,加入娃哈哈水,定容至刻度线,混匀。用1000ml 量筒,准确量取850ml ,用砂芯过滤装置并用0.45纤维滤膜过滤。再用250ml 量筒准确量取150ml 乙腈(色谱级),并将砂芯过滤装置滤膜换成0.45尼龙膜,过滤,混匀将流动相转移置流动相专用瓶中,超声60min 脱气(若脱气过程中导致流动相温度升高,将其放入冰箱冷却至室温,取出备用)。

4.3 流速:1ml/min

4.4 检测波长:535nm

4.5 进样量:20μl

4.6 柱温: 25℃

4.7检测器: VWD(紫外检测器)

5. 操作步骤

5.1 供试品溶液的制备

5.1.1原料处理:用电子天平精确称取粉末3-5g ,置于100mL 容量瓶中,加入用5%盐酸-甲醇稀释,定容至刻度线,摇匀,超声至原料无色,冷却,用有机系针头过滤器滤过,即得。

5.1.2成品半成品样品处理:取成品粉末20mg 左右或半成品液体1ml 于25容量瓶中,用5%盐酸-甲醇稀释,用针头过滤器过滤即得。

5.2 标准品溶液的制备

取矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对照品,精密称定,加5%盐酸-甲醇制成每1mL 含50μg 的溶液。

5.3 将标准品溶液、供试品溶液各20μl 分别注入HPLC 仪(进样量要求是定量环的3倍用量即60μl )。

6. 计算

其中 A样:样品峰面积

A标:标准品峰面积 C标:标准品浓度(mg/ml) M样:样品称样量(mg ) f :样品的定容体积(ml )

P:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量(%)

紫外可见分光光度法测定

红米及其提取物中花青素含量的操作规程

目 的:建立紫外可见分光光度法测定红米及其提取物中花青素含量的操作规程。 范 围:本规程规定了紫外可见分光光度法测定红米及其提取物中花青素含量测定。

依 据:

内 容:

1. 试剂

1.1甲醇(AR )

1.2 盐酸(AR )

1.3 5%盐酸甲醇:盐酸:甲醇=5:95(V/V)

2. 仪器和用具 .

2.1 电子天平(0.0001)

2.2 玻璃仪器:容量瓶 移液管

2.3 超声波清洗器

2.4 紫外分光光度计

2.5 比色皿(1cm )

3. 样品制备

3.1 精密称取红米样品10.00mg 加5%盐酸甲醇超声溶解,取出冷却定容至100ml, 摇匀,待用。

3.2 精密吸取上述溶液5ml 置于50ml 的容量瓶中, 加5%盐酸甲醇稀释, 定容至刻度, 摇匀, 待测(这一步稀释倍数根据样品含量而定,若吸光度在规定范围内,此步骤

省略)

4. 检测条件

用1cm 玻璃比色皿在535nm 波长下测定其吸光度(A ),用5%盐酸甲醇溶液作空白对照。

5. 结果计算

花青素含量= ×100%

式中:

1020:飞燕草素摩尔吸收值

A : 样品的吸光度值

m : 样品的称样量(g )

f : 稀释倍数

结果的表述:报告算术平均值保留小数点后四位。

实验结果:以平行测定结果的算术平均值为准。

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1 %

6. 相关记录

《常规记录》

A ×f

2010×m